[摘要]：目的针对款冬花药材掺杂现象，对款冬花药材中花蕾及其杂质(花梗、根茎、主根)的化学组成进行比较，为款冬花的质量控制提供依据。方法参照《中国药典》年版，采用HPLC测定款冬花蕾及其杂质中款冬酮的含量，同时建立款冬花指纹图谱，采用相似度评价和共有峰峰面积对花蕾及杂质进行比较，对药材中各成分含量与花蕾占比进行Pearson相关性分析，同时对花蕾和杂质进行主成分分析和聚类分析，并分析各类成分之间的相关性。结果款冬花蕾中款冬酮含量以及指纹图谱中13个共有峰的峰面积均明显高于其他掺杂部位，且与花蕾占比存在正相关。主成分分析和聚类分析结果显示，款冬花蕾与花梗、根茎、主根等掺杂部位可明显区分。指纹图谱各主要成分之间的相关性分析显示，咖啡酰奎宁酸类成分之间、黄酮类成分之间存在较强的正相关，倍半萜类成分中，款冬酮和款冬素酯存在较强的正相关，不同类别的成分也具有一定的相关性。结论款冬花药材中主要成分均主要分布于花蕾，当药材中花梗、主根、根茎等杂质较多时会严重影响款冬花药材质量。目前《中国药典》年版中款冬花项下尚未设置杂质检查项目，为了保证款冬花药材的质量，应增加其杂质检查。[关键词]：款冬花掺杂款冬酮指纹图谱质量控制款冬花为菊科款冬植物款冬TussilagofarfaraL.的干燥花蕾，性温，辛、微苦，具有润肺下气、止咳化痰的功效，临床用于劳嗽咳血、喘咳痰多、新久咳嗽。商品款冬花药材有野生和栽培2种，野生款冬花主要分布于甘肃、山西北部等，由于近年来野生资源的枯竭和款冬花需求量的增加，目前款冬花来源以人工栽培品为主，甘肃定西、河北张家口、内蒙古通辽等地均有较大规模种植。款冬花的药用历史最早记载于东汉的《神农本草经》，南朝时期《本草经集注》提到款冬花“第一出河北，其形如宿莼、未舒者佳，其腹里有丝”，明代的《药品化义》记载：“取紫花者良，去蒂根用”，说明本草中明确提到款冬花药用时应除去非药用部位。历版《中国药典》中均明确提到“除去花梗及泥土”。其中《中国药典》年版提到“无花梗者为佳”，《中国药典》年版修订为“花梗短者为佳”。近年来，中药材掺杂非药用部位问题严重时有发生，比如夏枯草药材中掺入根、茎、叶代替果穗入药；淫羊藿药材中茎、柄等非药用部位大量存在；细辛药材中带有较多的泥沙等杂质，严重影响中药的质量以及临床用药的安全有效。赵晶等在药材检验和市场调查中发现目前市场上款冬花药材均含有不同程度的非药用部位杂质。根据对安徽亳州、河北安国、广西玉林、四川荷花池等国内主流药材市场调查发现，市场中款冬花选货较少，统货掺杂问题严重，所掺入的杂质除了花梗、根茎之外，还有切片或切段后的主根。款冬花药材中掺杂的非药用部位严重影响款冬花的药材质量，针对该现象，本研究拟对款冬花蕾及其杂质（花梗、根茎、主根）进行系统的化学比较，明确掺杂对款冬花药材质量的影响，为保证款冬花临床用药的有效性提供依据。1材料与仪器1.1药材与试剂款冬花药材购于国内主要药材市场以及产区，均经山西大学秦雪梅教授鉴定为款冬TussilagofarfaraL.的干燥花蕾（表1）。样本保存在山西大学中医药现代研究中心。甲醇（天津市大茂化学试剂厂，分析纯）；乙醇（天津市致远试剂有限公司，分析纯）；水（ROP纯水仪，力康生物医疗科技控股有限公司）；色谱纯甲醇、乙腈、磷酸购自FisherChemical；对照品绿原酸（批号-，质量分数为99.3%）、款冬酮（批号-，质量分数为98.5%）购自中国食品药品检定研究院；槲皮素（批号YJ-）、隐绿原酸（批号YJ-）、金丝桃苷（批号YJ-）、山柰酚（批号YJ-）、新绿原酸（批号YJ-）购自江苏永健医药有限公司；芦丁（批号）购自上海盛中医药化工有限公司；异绿原酸B（批号）、异绿原酸A（批号）、异绿原酸C（批号），均购自成都普瑞法科技开发有限公司；对照品质量分数均大于98%；甲基丁酰-3，14-Z-去氢款冬素酯、色原酮、1β，8-bisangeloyloxy-3β，4β-epoxybisabola-7(14)，10-diene为本课题组从款冬花中分离、纯化，经HPLC归一化法测定其质量分数均在98%以上。1.2仪器美国AgilentHPLC系统（配置在线真空脱气机，四元梯度泵GC，柱温箱GA，自动进样器GB，紫外检测器GF与Agilent色谱工作站）；超声波清洗器KQ-型（昆山市超声仪器有限公司）；SartoriusBSAS分析天平（德国Sartorius公司）。2方法2.1药材掺杂率的统计将不同产地的12批款冬花药材采用圆锥四分法分别取g，并按花蕾、花梗、根茎、主根、泥沙碎瓣（图1）进行分类，称量并计算花蕾及不同掺杂部位的占比。2.2款冬酮的测定样品制备方法和色谱条件参照《中国药典》年版款冬花项下款冬酮的含量测定方法。色谱柱：GLSciencesInertsilODS-3C18(mm×4.6mm，5μm）；体积流量1.0mL/min；柱温25℃；进样量20μL。款冬酮对照品及款冬花样本液相色谱图见图2。精密吸取10μL的对照品溶液和供试品溶液，按照《中国药典》年版方法进行测定。2.3指纹图谱的建立2.3.1色谱条件色谱柱为Agela-venusilMPC18(mm×4.6mm，5μm）；以乙腈为流动相A，0.4%磷酸水为流动相B进行洗脱（0～10min，13%A；10～25min，13%～40%A；25～30min，40%～90%A；30～45min，90%～95%A），体积流量1.0mL/min；柱温25℃；进样量10μL；分段变波长测定，0～25min，nm；25～45min，nm检测；理论板数按绿原酸计算应不低于。2.3.2对照品溶液的制备精密称定各对照品适量，加甲醇分别制成质量浓度为1.0mg/mL的母液，4℃保存备用。2.3.3供试品溶液的制备精密称取款冬花粉末（过四号筛）1.0g，置具塞锥形瓶中，加入50%甲醇20mL，称定质量，超声处理（功率W，频率40kHz)30min，放置冷却至室温，用50%甲醇补足减失质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.3.4精密度试验取款冬花药材粉末（2号）制备供试品溶液，根据“2.3.1”项色谱条件连续进样6次，以绿原酸为参照峰，各色谱峰相对保留时间的RSD在0.02%～0.66%；相对峰面积的RSD在0.60%～2.05%，表明款冬花的待测溶液通过高效液相色谱分析，整个检测系统的精密度良好。2.3.5重复性试验取款冬花药材粉末（2号）制备供试品溶液，平行制备6份，根据“2.3.1”项色谱条件连续进样测定，以绿原酸为参照峰，各色谱峰相对保留时间的RSD在0.01%～0.09%；相对峰面积的RSD在0.28%～1.92%，表明该方法重复性良好。2.3.6稳定性试验取款冬花药材粉末（2号）制备供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h测定指纹图谱，绿原酸作为参照峰，样品24h各色谱峰相对保留时间的RSD在0.01%～0.64%；相对峰面积的RSD在0.63%～2.18%，表明款冬花的待测溶液在24h内通过高效液相色谱分析稳定性良好。2.3.7数据分析采用中药指纹图谱相似度评价软件（2.0版），选择中位数法以12批花蕾的指纹图谱生成对照指纹图谱，通过中药指纹图谱相似度评价软件校正14个共有峰后，采用夹角余弦法分别计算12批花蕾、花梗、主根、根茎与对照指纹图谱的相似度。通过Mark峰匹配得到各批次样本的共有峰的峰面积，用于比较各化合物的相对含量。采用SPSS软件（18.0），计算各化合物相对含量（以峰面积表示）与花蕾占比的Pearson相关系数。将12批款冬花样品花蕾及掺杂部位的指纹图谱中共有峰峰面积所得到的数据矩阵，导入SIMCA-P13.0软件中进行主成分分析。通过Metaboanalyst4.0(